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NGS科研用建库试剂盒
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K02421T-S/L RNA Seq Library Preparation Kit for Transcriptome Discovery–Illumina Compatible

流程介绍
台湾快3查询RNA转录组测序文库构建试剂盒主要特点有:单管反应,较少的实验操作,一天即可完成整个流程。测序接头直接连接在mRNA或合成的第一条cDNA上,这使得我们能对转录组进行方向性测序。这种方法所提供的方向性信息对RNA从头测序(de novo)来说有极大的帮助,同时还有助于识别各种调控事件中相互关联的转录RNA信息。通过省略一些步骤,降低了样品起始量,该试剂盒可实现低至1ng mRNA样品的文库构建,还可以应用于FFPE样品的建库。

流程图


产品优势
• 更好的方向性信息——五种方向性RNA建库产品比较,本产品的方向性更好
• 更好的科学发现——对全转录组进行方向性测序
• 更简单的流程——省略了第二条cDNA链合成和接头连接步骤
• 更小的样本初始量——低至1ng mRNA
• 单管反应,整个实验流程只需一天

常见问题解答
1. 在RNA转录组建库流程中用到Gnome Size Selector的原理及用途?
在RNA转录组建库流程中3次用到Gnome Size Selector。第一次是在RNA5’接头连接之后,是RNA水平的size selection。目的是去除未连接的5’接头,并进行缓冲液的置换。第二次是在第一链cDNA合成之后,是单链cDNA的size selection。目的是去除多余的RT primer,并进行缓冲液的置换。第三次是对PCR产物进行分子量区间的筛选,是更常规意义上的size selection。

2. RNA断裂的大致片段区间是多少?
在我们提供的断裂体系中,95度5min断裂的片段大小大概在100-700nt。其中主要片段分布在300-500nt。对分子量区间有其它要求的用户请联系技术支持。

3. RNA Seq 构建的文库接头和Illumina的接头是否有区别?
用我们的方法构建的RNA Seq的文库和IlluminaTruSeq 完全兼容。当然由于流程的区别,选用的各种adaptor和逆转录引物是不同的,所以不可以用Illumina的RT或PCR引物替换我们提供的引物。

4. RNA转录组样品制备是否有方向性?接头是怎么加的?
RNA转录组文库构建是有方向性的。在被断裂的RNA5’端加上接头,在合成第一链cDNA的时候通过逆转录引物引入另一个接头。这样生成的第一链cDNA的两端各有一个接头,mRNA序列对应的5’和3’接头序列是不一样的。所以测序得到的结果可以知道序列的走向。

5. RNA转录组样品制备,整个流程需要多长时间?原因是为什么?
RNA转录组样品制备步骤简单,耗时少,只需要6个小时即可完成。主要步骤为RNA断裂,5’接头的连接,第一条cDNA的逆转录和PCR扩增及纯化。因为减少了第二条cDNA链的生成和下游DNA文库的构建,所以流程大大缩短。

6. 高通量测序RNA 转录组样品制备,mRNA一般的用量是多少?最低起始量是多少?
mRNA一般的用量是100ng,PCR进行10-13个循环。mRNA起始量可以降到10ng,PCR进行15个循环左右,得到的数据信息覆盖率和100ng差别不大。如图1所示,10ng与100ng的样品起始量建库所得数据,经数据分析,两者的基因组匹配率与外显子匹配率差别不大。


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